美国科罗拉多州立大学Robert E. Cohen研究小组:高亲和力游离泛素传感器
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美国科罗拉多州立大学Robert E. Cohen研究小组取得一项新突破。该研究组描述了一种基于亲和力的荧光传感器,该传感器能够特异性结合游离泛素分子,解离常数Kd值小于60pM,加上新开发的工作流,使得研究者能够在细胞裂解物中区分和量化游离的、连有蛋白质的和巯基酯形式的泛素。
据介绍,泛素(Ub)连接是一种十分重要的翻译后修饰,几乎影响真核生物内的所有蛋白质。泛素化的功能和机制得到了广泛地研究,然而其动力学和游离(未连接的)泛素分子调节机制还知之甚少,其中一个主要障碍是缺乏简单可靠的技术来量化细胞内泛素化水平,及监控结合物中泛素分子的释放。另外,通过传感器染色,研究者通过显微镜在固定细胞内观测到了游离泛素。通过传感器实时分析,能够十分灵活且精密地测定任何(多)泛素连接物的去泛素化。
他们的最新研究提出了高亲和力游离泛素传感器,能够准确定量泛素稳态和去泛素化。 相关论文于2019年8月2日发表在《自然—方法学》上。