罗列影响实验室显微镜成像的重要因素
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将微小物体或物体的微细部分高倍放大,以便观察的仪器或设备。它广泛应用于工农业生产及科学研究。生物学和医学工作者在业务中也经常使用显微镜。大致分为光学显微镜和电子显微镜。
光学显微镜成像原理:使用无限远光学系统的显微镜主要由物镜、管镜和目镜组成。标本经物镜和管镜放大后,形成放大倒立的实象;实象经目镜再次放大后,形成放大的虚象。 标本(AB)在物镜(Lo)焦点上,通过物镜(Lo)和管镜(Le)在象方形成放大倒立的实象(A’B’);靠近人眼一方的目镜(Le)对中间象(A’B’)再次放大,在明视距离(对人眼来说约为250mm)处形成一个虚象(A”B”)。 人眼通过显微镜所观察到的象就是一个被放大了的虚象A”B”。
电子显微镜成像原理:电子显微镜是根据电子光学原理,用电子束和电子透镜代替光束和光学透镜,使物质的细微结构在非常高的放大倍数下成像的仪器。电子显微镜的分辨能力以它所能分辨的相邻两点的最小间距来表示。20世纪70年代,透射式电子显微镜的分辨率约为0.3纳米(人眼的分辨本领约为0.1毫米)。现在电子显微镜最大放大倍率超过300万倍,而光学显微镜的最大放大倍率约为2000 倍,所以通过电子显微镜就能直接观察到某些重金属的原子和晶体中排列整齐的原子点阵。影响实验室显微镜成像的重要因素有:
1、使用显微镜时,被检物体做的较标准很重要。如:切片厚度是否太厚,盖玻片是否符合国标等。
2、显微镜物镜按档次可分为约6-8个档,最常用的为平场消色差物镜。如镜头档次太低,则成像质量会下降。因此,建议选择平场以上档次物镜。
3、聚光镜孔径光栏,尽量和物镜的数值孔径相符。才能得到最佳的图像分辨率。
4、调焦系统作为机械部分的重要部件,调焦精度也非常重要。对于生物学初学者或刚接触显微镜的操作者,熟练的使用调焦系统,能快速找到图像并聚焦,提高工作效率。
5、载物台在观察切片时,常做X,Y的移动。如:双层的机械移动平台,精度和稳定性较好,能在观察显微图像时提供好的成像质量。
6、非球面集光镜能提供非常均匀的照明光线,所观察到的显微图像衬度极佳。
7、视场光栏应根据观察不同的被检物体和物镜倍率开启到合适的位置,如开得过大或过小显微图像的视场亮度会受到影响。
8、照明系统如采用温度低,色温较高的照明装置,观察到的是分辨率和锐利度极高的显微图像。
9、采用柯拉照明系统,能调节光学的中心像。科研级的显微镜均采用此系统,为镜检和专业数码显微成像系统,提供优质的显微照片。